Q1.可以用模擬樣本溶液+國際校準(zhǔn)品做企業(yè)參考品嗎？

可以

Q2.定量參考品可以沒有陰性參考品嗎？

根據(jù)產(chǎn)品性能決定。定量產(chǎn)品參考品一般至少包括準(zhǔn)確度參考品、線性參考品、精密性參考品、靈敏度參考品，根據(jù)不同產(chǎn)品性能有些還包含特異性參考品、陽性參考品、陰性參考品、亞型檢測能力參考品等。

Q3.在沒有國家參考品、已上市試劑盒的情況下，檢驗病毒類的產(chǎn)品參考品賦值的方法或者單位應(yīng)該是什么？（TCID50？）

使用生物學(xué)單位（TCID50/PFU）用于參考品賦值是目前趨勢。企業(yè)也可以用數(shù)字PCR等方法建立拷貝數(shù)（U）與TCID50之間的濃度對應(yīng)關(guān)系后，用拷貝數(shù)單位賦值。

Q4.參考品樣本有比較規(guī)范的獲得方式嗎？

建議直接與機構(gòu)簽署科研臨床協(xié)議獲得臨床樣本。

Q5.不確定度怎么評估？（多批 效期重復(fù)）

不確定度用以表征準(zhǔn)確度，此概念多用于定性產(chǎn)品，通常用陽性/陰性符合率表示試劑的準(zhǔn)確度。評估不確定度的基本思想是誤差的類型對測量結(jié)果的使用者來說是不重要的，因為是所有誤差的凈效應(yīng)決定測量結(jié)果的不確定度，包括整個溯源鏈中的所有變異分量。對于定性產(chǎn)品。例如產(chǎn)品穩(wěn)定性研究中，不確定度研究方法是使用多批次產(chǎn)品，在效期內(nèi)不同階段，檢查參考品的陽性/陰性符合率。

Q6.引物，探針，dNTP，酶等外購的可以直接用供應(yīng)商的COA，全部配在一起做一功能性試驗嗎？還需要按照指導(dǎo)原則和標(biāo)準(zhǔn)做濃度，純度，堿基缺失率，序列一致性，HPLC嗎？

可以用供應(yīng)商的COA，但不建議一起做功能性試驗。

Q7.主要原材料自身發(fā)生變化的，如抗體本身發(fā)生變化的，是要重新注冊嗎？

需要。

Q8.主要原材料研究和反應(yīng)體系研究中，是否需要用整套參考品去做，還是有選擇性的挑選來做，挑選的原則是怎么樣的？

不需要。挑選有代表性的陽性和交叉陰性參考品。

Q9.請問免疫類試劑盒檢測的是病毒的某個抗原（比如結(jié)構(gòu)蛋白），參考品是應(yīng)該設(shè)置為全病毒（活的）還是陰性樣品+抗原蛋白？如果參考品是全病毒，賦值應(yīng)該是對”病毒數(shù)“賦值，還是對抗原蛋白含量進行賦值？

優(yōu)先選擇臨床樣本。對于難以獲得可選擇毒株，病毒數(shù)建議用TCID50或者PFU。

Q10.做分析性能驗證主要原材料需要有2個批次的要求嗎？

需要。

Q11.請問企業(yè)參考品需要體現(xiàn)在技術(shù)要求中嗎（三類IVD）？

需要3個批次轉(zhuǎn)產(chǎn)后的產(chǎn)品。

Q12.遺傳病染色體微缺失微重復(fù)的樣本賦值采用什么方法？（定性的產(chǎn)品）

用臨床參考方法如CMA、FISH等進行賦值。

Q13.組織切片類標(biāo)準(zhǔn)品如何制備，組織切片做參考品的話，怎么溯源？

制備：購買權(quán)威機構(gòu)認(rèn)可或發(fā)補的有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CRM），制造商通過使用標(biāo)準(zhǔn)測量程序測量賦值,將有證參考物質(zhì)的正確度傳遞給產(chǎn)品校準(zhǔn)品。組織切片參考品溯源：參考品溯源的重點是計算量溯源，及賦值，另外樣本信息溯源等。參考品計算量溯源可以通過有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（CRM）和普遍認(rèn)可的測量程序來實現(xiàn)。

Q14.最低檢測IFU是怎么做到的？？

例如，可以采用已測定IFU（TCID50或PFU）濃度的樣本進行梯度稀釋，以95%檢出率的最低濃度作為LoD。

Q15.沒有國參的病毒，拷貝數(shù)怎么確定？分光光度法跟分子量計算嗎？

如有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（計量院等單位購買），采用有證標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和數(shù)字PCR檢測，確定拷貝數(shù)；如沒有標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可以自己用質(zhì)粒建立后者直接用數(shù)字PCR定量。分光光度法和分子量計算方法精度不夠，一般不推薦使用。

Q16.TCID50，同一種，但不同來源病毒都不一樣，與拷貝數(shù)關(guān)聯(lián)只能代表已做相關(guān)性驗證的這個病毒的關(guān)系，如何外推至其他同種病毒？

同一來源的病毒株不同生長周期的TCID50和拷貝數(shù)關(guān)系也不一樣，通常選取病毒主要流行地發(fā)病期的病毒株進行細胞培養(yǎng)，建立TCID50和拷貝數(shù)的關(guān)系，其它病毒株以此為參考。

Q17.請問企業(yè)參考品是在產(chǎn)品成型后制備？還是最初制備，引物探針等篩選時采用參考品進行篩選？

企業(yè)參考品在轉(zhuǎn)產(chǎn)前原材料研究階段完成。引物探針等的性能驗證試驗可能需要使用參考品來驗證。

Q18.USP參考物質(zhì)可以當(dāng)作國際標(biāo)準(zhǔn)品嗎？

如境內(nèi)沒有可以。一般優(yōu)先選用擬上市地區(qū)認(rèn)可標(biāo)準(zhǔn)品。

Q19.企業(yè)參考品怎樣規(guī)避hook效應(yīng)造成的影響？

先確定HOOK效應(yīng)的濃度，然后控制參考品濃度。

Q20.陰性參考品里可以不放交叉樣本嗎？把交叉放到性能分析里。

陰性參考品需要設(shè)置有代表性的交叉樣本。特異性研究中需要更全面的研究可能造成交叉反應(yīng)的型別或類型。

Q21.核酸類產(chǎn)品組份中有陽、陰性參考品，是由外方一先合成的工程菌，再由外方二進行的擴培后供給我們作為陽、陰參考品的原材料，那我們技術(shù)要求中，原材料的供應(yīng)商怎么寫呢？

外方二。

Q22.工藝性能研究實驗時，只做了配套儀器質(zhì)控，沒做申報試劑的質(zhì)控，有什么影響嗎？

工藝及反應(yīng)體系研究中需要進行體系有效性驗證，包括參考品質(zhì)控體系、檢驗試驗試劑盒質(zhì)控品質(zhì)控體系等。

Q23.企業(yè)參考品基質(zhì)必須要與臨床樣本保持一致嗎？

絕大多數(shù)要求一致。也有特殊情況，例如產(chǎn)品是通過多種檢測物與各自閾值比較的結(jié)果采用算法綜合評分出具診斷結(jié)果，而人源陰性樣本中經(jīng)常出現(xiàn)隨機單種檢測物結(jié)果高于閾值的情況，然后在提供充分證據(jù)后，可以設(shè)置單種檢測物參考品時其他基質(zhì)。